Microsc. Microanal. Microstruct. 7, 317-322 (1996)
DOI: 10.1051/mmm:1996128

Numerical Acquisition of Multiple Immunofluorescence Labelling

Catherine Souchier^{1, 2}, Mehdi Benchaib¹, Richard Delorme¹, Paul André Bryon¹ et Alain Niveleau<sup>2

1</sup>  Cytologie Analytique, 8 av. Rockefeller, 69373 Lyon Cedex 08, France
²  Centre Commun de Quantimétrie, 8 av. Rockefeller, 69373 Lyon Cedex 08, France

Abstract
Tools used in numerical acquisition of epi-fluorescence images are evaluated. Using multiple-band filter sets, the intensities of blue and red emitting fluorochromes are reduced. Color images may be reconstructed from monochrome images. Nevertheless, they may have X/Y and Z shifted and need to be realigned before being superimposed. Confocal laser scanning microscope (CLSM) presents an advantage mainly for 3D microscopy of thick specimens. Apart from camera performances, user interface is a key point in image acquisition.

Résumé
Cet article présente une évaluation d'outils développés pour l'acqui sition numérique d'images de fluorescence. Les filtres double ou triple bande réduisent l'intensité des fluorochromes dont l'émission se situe dans le rouge et le bleu. L'image couleur d'un marquage multiple peut s'obtenir par combinaison d'images monochromes, à condition de vérifier et de corriger si nécessaire l'aligne ment en X, Y et Z. La microscopie confocale présente un intérêt essentiellement pour l'étude d'échantillons épais et l'analyse 3D à fort grossissement. Indépendamment des caractéristiques des caméras, l'inter face utilisateur apparaît comme un point clé dans l'acquisition des images.

PACS
0760P - Conventional optical microscopes.
8764T - Confocal microscopy.
4230V - Image forming and processing.
0705P - Image processing.

Key words
Theoretical study -- Fluorescence microscopy -- Confocal microscopy -- Fluorescent labelling -- Immunofluorescence -- Data acquisition -- Digital image -- Optics -- Physics


© EDP Sciences 1996